<<
>>

2.6. Исследование поглощения и внутриклеточной локализации тетраарилтетрацианопорфиразинов

Исследование проводили с использованием системы лазерной сканирующей микроскопии Axiovert 200M LSM-510 META NLO (Carl Zeiss, Г ермания).

3

Клетки рассевали на тонкодонные 96-луночные планшеты по 3x10 клеток на лунку и инкубировали в течение ночи.

Затем питательную среду заменяли на раствор исследуемого соединения (5 мкМ) в питательной среде или в 10 мМ фосфатном буфере PBS. Изображения получали через 30, 40 или
60 минут без отмывки клеток от фотосенсибилизатора. В экпериментах по оценке динамики накопления ФС в отдельных клетках получали серию изображений с интервалом в 4 секунды начиная с момента добавления ФС, длительность наблюдения составляла 20 минут.

Для определения внутриклеточной локализации тетраарилтетрациано- порфиразинов были использованы клетки линии Т24, экспрессирующие зелёный флуоресцирующий белок TagGFP2 (Евроген, Россия) в цитоплазме, митохондриях (в составе слитого белка с VIII субъединицей цитохром-С- оксидазы) или ядрах (в составе слитого белка с ламином).

Для ингибирования клатринового пути эндоцитоза использовали хлорпромазина гидрохлорид (Sigma, США) [133, 213]. Клетки

предынкубировали с раствором хлорпромазина (5 мкг/мл) в PBS в течение 30 мин, аналогичная концентрация хлорпромазина содержалась в растворе при инкубации с исследуемым флуорофором.

<< | >>
Источник: Шилягина Наталья Юрьевна. ИССЛЕДОВАНИЕ ТЕТРААРИЛТЕТРАЦИАНОПОРФИРАЗИНОВ В КАЧЕСТВЕ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОВ ДЛЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ И ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ДИАГНОСТИКИ. 2014

Еще по теме 2.6. Исследование поглощения и внутриклеточной локализации тетраарилтетрацианопорфиразинов:

  1. Шилягина Наталья Юрьевна. ИССЛЕДОВАНИЕ ТЕТРААРИЛТЕТРАЦИАНОПОРФИРАЗИНОВ В КАЧЕСТВЕ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОВ ДЛЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ И ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ДИАГНОСТИКИ, 2014
  2. IV.2. ПОГЛОЩЕНИЕ АЭРОИОНОВ ВНЕШНЕГО ВОЗДУХА РАЗНЫМИ ФИЛЬТРАМИ И ПРИ КОНДИЦИОНИРОВАНИИ
  3. Специальные методы оценки антропогенных измененийи локализации нарушений окружающей среды
  4. ТЕОРИЯ СИСТЕМНОЙ ДИНАМИЧЕСКОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ ВЫСШИХ ПСИХИЧЕСКИХ ФУНКЦИЙ'
  5. Александр Романович Лурия (1920—1975) Теория системной динамической локализации высших психических функций в мозге
  6. Методы исследования функций иммунной системы. Иммунологические исследования психических болезней
  7. Исследования крупным планом. Исследование неформальной коммуникативной сети в государственной организации
  8. Глава 3 Проблемы научного исследования психических явлений. Как добиться верности, правдоподобности, объективности знаний, получаемых в ходе исследования?
  9. 4. Строго соблюдать последовательность исследования, не пропускать ни единого звена в логической цепочке исследования.
  10. II. МЕТОДЫ (МЕТОДИКИ) ПАТОПСИХОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МЕТОДИКИ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ВНИМАНИЯ И СЕНСОМОТОРНЫХ РЕАКЦИЙ
  11. 1.5. Проблемы, связанные с овладением научными знаниями 1.5.1. Отношение научного исследования и научных знаний к объективной реальности. Валидность в организации научного исследования и его результатов
  12. 3.1. Исследование реакции взаимодействия элементного фосфора с ДФПГ в различных растворителях
  13. V. Исследование
  14. 2.2 Методы исследований
  15. Методология и объект исследования
  16. Исследование программ
  17. 2.1 Объекты исследования